مبادئ تخليق الحمض النووي

يتم تنفيذ تخليق الحمض النووي باستخدام طريقة ثلاثي الجليسريد أميد السياليك في الطور الصلب، حيث يتم تثبيت الطرف 3′ من الحمض النووي على ركيزة الطور الصلب وتضاف النيوكليوتيدات في الاتجاه 3′ إلى 5′ حتى يتم تصنيع جزء الحمض النووي المطلوب .وهذا يختلف عن تخليق الحمض النووي عن طريق تطبيق بوليميراز الحمض النووي.

يتم تثبيت الطرف 3′ من القاعدة الأولى على CPG أثناء التوليف، ويتم حماية 5′-OH من القاعدة التالية باستخدام di-p-tolyl trityl DMT، ويتم حماية المجموعة الأمينية الموجودة في القاعدة بحمض البنزويك و3′ يتم بعد ذلك تنشيط -OH بمركب الفوسفات الأميني.تشكل قاعدة واحدة من 5 5′-OH من قاعدة واحدة و3′-OH من القاعدة التالية ثلاثي جليسريد فوسفيت، والذي يتم أكسدته بعد ذلك مع اليود إلى ثلاثي جليسريد فوسفات، تتم إزالة المادة الحامية الموجودة في القاعدة الثانية 5′-OH بواسطة إضافة دورات حمض ثنائي كلورو أسيتيك DM من خلال إضافة القاعدة التالية، وبعد التوليف، تتم إزالة المادة الحامية الموجودة على 5′-OH بحمض ضعيف. يتم فصل الجزء عن الراتينج الصلب باستخدام هيدروكسيد الأمونيوم المركز، ويتم إزالة المادة الحامية من القاعدة مع تركيز هيدروكسيد الأمونيوم تحت التسخين، تتم إزالة هيدروكسيد الأمونيوم، ويتم تجفيف الجزء بالفراغ، ويتم تنقية الحمض النووي بواسطة تحليل كروماتوجرافي سائل أو PAGE.

خطوات توليف أوليجو

فك الحظر

التتم إزالة مجموعة حماية DMT 5 عن طريق إضافة محلول TCA.

التنشيط

خلط المنشط مع مونومر قليل النوكليوتيد لتكوين مونومر قليل النوكليوتيد النشط.

اقتران

تتفاعل مجموعة الهيدروكسيل ذات 5 أطراف مع قليل النوكليوتيد النشط الوسيط في تفاعل تكثيف مضاد للتوليد لتكوين رابطة ثلاثية الجليسريد الفوسفيتية غير المستقرة.

السد 

تؤدي إضافة عامل التغطية إلى إجراء تفاعل تغطية الأسيتيل مع مجموعات الهيدروكسيل الزائدة التي لا تشارك في تفاعل التكثيف.

أكسدة 

تتفاعل إضافة محلول اليود المحتوي على الماء مع روابط الفوسفيت غير المستقرة عن طريق الأكسدة لتكوين روابط ثلاثية الجليسريد لحمض الفوسفوريك.

انقسام سيانو إيثيل

منتج الحمض النووي بعد تخليقه، مع إضافة محلول DEA لإزالة مجموعة السيانويثيل من رابطة الفوسفات الثلاثية.

المشقوق وإزالة الحماية

يتم فصل شظايا الحمض النووي من حامل الطور الصلب عن طريق إضافة محلول هيدروكسيد الأمونيوم المركز ثم تسخينها لإزالة مجموعات الحماية من الروابط الهيدروجينية للقواعد.