في التوليف النموذجي للحمض النووي الريبي (DNA) والحمض النووي الريبي (RNA) والأحماض النووية غير الطبيعية، تلعب خطوة إزالة الحماية والاقتران أدوارًا حاسمة.
تتمثل خطوة إزالة الحماية في إزالة مجموعة DMT الموجودة على الدعامة الصلبة أو مجموعة الهيدروكسيل 5' الموجودة على النيوكليوسيد السابق مع الحمض العضوي، وكشف مجموعة الهيدروكسيل لخطوة الاقتران التالية.يتم استخدام حمض ثلاثي كلورو أسيتيك بنسبة 3% في ثنائي كلورو ميثان أو التولوين في الغالب لتنفيذ خطوة إزالة الحماية.يهيمن تركيز حمض ثلاثي كلورو أسيتيك وزمن إزالة الحماية (زمن إزالة الحجب) على نقاء المنتجات النهائية.يؤدي التركيز المنخفض ووقت إزالة الحظر غير الكافي إلى ترك مجموعة DMT غير متفاعلة، مما يقلل من المحصول ويزيد من الشوائب غير المرغوب فيها.قد يؤدي وقت إزالة الحظر الطويل إلى إزالة البيورين من التسلسلات المركبة، مما يشكل شوائب غير متوقعة.
تعتبر خطوة الاقتران حساسة لمحتوى الماء في المذيبات والرطوبة الموجودة في الهواء.يجب أن يكون تركيز الماء في التركيب أقل من 40 جزء في المليون، ويفضل أن يكون أقل من 25 جزء في المليون.للحفاظ على حالة التخليق اللامائي، يجب أن يتم تصنيع الأحماض النووية في بيئة منخفضة الرطوبة، لذلك نوصي عملائنا باستخداممعدات الأميديت المذابة، والذي يمكنه إذابة الفوسفوراميت المسحوق أو الزيتي في الأسيتونيتريل اللامائي لتجنب ملامسته للهواء.
نظرًا لأن ذوبان الفسفوراميديت أفضل في الوضع غير المائي، والمصائد الجزيئية لامتصاص الماء النزر في الكواشف والأميديت، فمن الضروري تحضيرالفخاخ الجزيئية.نحن نوصي بـ 2 جرام من الغربال الفرعي لزجاجات الكاشف 50-250 مل، 5 جرام لزجاجات الكاشف 250-500 مل، 10 جرام لزجاجات الكاشف 500-1000 مل، و20 جرام لزجاجات الكاشف 1000-2000 مل.
يجب أن يتم إذابة الفوسفوراميديت تحت جو خامل، ويجب الانتهاء من استبدال الكواشف المنشطة والأسيتونيتريل في الوقت المناسب.يجب استخدام كواشف السد والأكسدة في أقرب وقت ممكن، والكواشف المفتوحة تعطي فترة صلاحية أقل، ونشاط أقل أثناء التوليف.
وقت النشر: 09 أغسطس 2022