في تخليق DNA و RNA والأحماض النووية غير الطبيعية النموذجية ، تلعب خطوة Deprotection and Coupling أدوارًا حاسمة.
تتمثل خطوة Deprotection في إزالة مجموعة DMT على الدعامة الصلبة أو مجموعة الهيدروكسيل 5 'على النيوكليوزيد السابق مع حمض عضوي ، وتعريض مجموعة الهيدروكسيل لخطوة الاقتران التالية.يستخدم حمض ثلاثي كلورو أسيتيك بنسبة 3٪ في ثنائي كلورو ميثان أو التولوين في الغالب لتنفيذ خطوة نزع الحماية.يهيمن تركيز حمض ثلاثي كلورو الخليك ووقت نزع الحماية (وقت إزالة القفل) على نقاء المنتجات النهائية.يترك التركيز المنخفض ووقت إزالة القفل غير الكافي مجموعة DMT غير المتفاعلة ، مما يقلل من المحصول ويزيد من الشوائب غير المرغوب فيها.قد يؤدي وقت إزالة القفل الطويل إلى التخلص من التسلسلات المركبة ، مما يؤدي إلى تكوين شوائب غير متوقعة.
تعتبر خطوة الاقتران حساسة للمحتوى المائي للمذيبات والرطوبة في الهواء.يجب أن يكون تركيز الماء في التوليف أقل من 40 جزء في المليون ، وأفضل من 25 جزء في المليون.للحفاظ على حالة التوليف اللامائي ، يجب إجراء تخليق الأحماض النووية في بيئة منخفضة الرطوبة ، لذلك نوصي عملائنا باستخدامAmidites الذائب المعدات، والتي يمكن أن تذيب مسحوق الفوسفوراميديت أو الزيت في الأسيتونيتريل اللامائي لتجنب ملامسته للهواء.
نظرًا لأنه من الأفضل إذابة الفوسفوراميديت في الوضع غير المائي ، كما أن الفخاخ الجزيئية تمتص الماء النزرة في الكواشف وأمديت ، فمن الضروري تحضيرالفخاخ الجزيئية.نوصي بتخزين 2 جم لزجاجات الكاشف 50-250 مل ، و 5 جم لزجاجات الكاشف 250-500 مل ، و 10 جم لزجاجات الكاشف 500-1000 مل ، و 20 جم لزجاجات الكاشف 1000-2000 مل.
يجب أن يتم إذابة الفوسفوراميديت تحت الغلاف الجوي الخامل ، ويجب الانتهاء من استبدال الكواشف المنشط والأسيتونتريل في الوقت المناسب.يجب استخدام كواشف السد والأكسدة في أسرع وقت ممكن ، الكواشف المفتوحة تعطي عمر تخزين أقل ، ونشاط أقل أثناء التوليف.
الوقت ما بعد: أغسطس 09-2022