في عملية التخليق النموذجية للحمض النووي DNA والحمض النووي الريبي RNA والأحماض النووية غير الطبيعية، تلعب خطوة إزالة الحماية والاقتران أدوارًا حاسمة.
تتمثل خطوة إزالة الحماية في إزالة مجموعة DMT من الدعامة الصلبة أو مجموعة الهيدروكسيل 5' من النيوكليوزيد السابق باستخدام حمض عضوي، مما يكشف مجموعة الهيدروكسيل لخطوة الاقتران التالية. يُستخدم حمض ثلاثي كلورو أسيتيك بنسبة 3% في ثنائي كلورو ميثان أو تولوين في الغالب لإجراء خطوة إزالة الحماية. يؤثر تركيز حمض ثلاثي كلورو أسيتيك ووقت إزالة الحماية (وقت إزالة الحجب) بشكل كبير على نقاء المنتجات النهائية. يؤدي انخفاض التركيز وعدم كفاية وقت إزالة الحجب إلى بقاء مجموعة DMT غير متفاعلة، مما يقلل من المردود ويزيد من الشوائب غير المرغوب فيها. قد يؤدي طول وقت إزالة الحجب إلى فقدان البيورين من التسلسلات المُصنّعة، مما يُشكّل شوائب غير متوقعة.
تتأثر خطوة الاقتران بمحتوى الماء في المذيبات ورطوبة الهواء. يجب ألا يتجاوز تركيز الماء في عملية التخليق 40 جزءًا في المليون، والأفضل أن يكون أقل من 25 جزءًا في المليون. وللحفاظ على ظروف التخليق اللامائي، ينبغي إجراء تخليق الأحماض النووية في بيئة منخفضة الرطوبة، لذا نوصي عملاءنا باستخدام...معدات الأميديت المذابة، والتي يمكنها إذابة الفوسفوراميديت المسحوق أو الزيتي في الأسيتونيتريل اللامائي لتجنب ملامسته للهواء.
بما أن ذوبان الفوسفوراميديت يكون أفضل في حالة عدم وجود الماء، ولأن المصائد الجزيئية تمتص آثار الماء في الكواشف والأميديت، فمن الضروري تحضيرالفخاخ الجزيئية.نوصي باستخدام 2 غرام من المنخل الفرعي لزجاجات الكواشف سعة 50-250 مل، و5 غرام لزجاجات الكواشف سعة 250-500 مل، و10 غرام لزجاجات الكواشف سعة 500-1000 مل، و20 غرام لزجاجات الكواشف سعة 1000-2000 مل.
يجب إذابة الفوسفوراميديت في جو خامل، ويجب استبدال عوامل التنشيط والأسيتونيتريل في الوقت المناسب. ينبغي استخدام عوامل التغطية والأكسدة في أسرع وقت ممكن، لأن العوامل المفتوحة تقلل من مدة صلاحيتها وفعاليتها أثناء التخليق.
تاريخ النشر: 9 أغسطس 2022